Орындаған: Алдибаева А. Әбдірахман М


Максам-Гильберт бойынша химиялық деградация әдісімен ДНҚ секвенирлеу

Loading...


бет6/8
Дата01.03.2021
өлшемі0.67 Mb.
1   2   3   4   5   6   7   8

Максам-Гильберт бойынша химиялық деградация әдісімен ДНҚ секвенирлеу


Химиялық деградация әдісі деп аталатын Максам-Гильберттің әдісі пайда болғаннан кейін нуклеин қышқылдарын секвенирлеу біршама маңызды жетістіктерге жетті. Бұл әдіс төрт азоттық негіз бойынша 5' -ұшты радиобелсенді белгісі бар ДНҚ-ның селективті химиялық модификациясына негізделген. Арнайы төрт химиялық реакция арқылы әр азоттық негіздерді өзгеріске түсіреді және фосфодиэфирлі байланыстарды үзеді.

ДНҚ-ның толық нуклеотидті реттілігін анықтау кезінде көп мөлшерде бірдей ДНҚ молекулалары қажет. Сәйкес фрагментті клондау арқылы қажетті реттілікті көбейтуге болады. Содан әр тізбектің 5'- немесе 3' ұштарына радиобелсенді белгі енгізеді.


  • Келесі саты - ДНҚ-ны балқытып, бір тізбекті ДНҚ-ны бөліп алу. Бөлініп алынған ДНҚ-ны 4 пробиркаға бөледі. Әр пробиркаға бір немесе екі белгілі азоттық негіздерді арнайы бұзатын химиялық реагент қосады. Нәтижесінде осы нуклеотид орналасқан жерде ДНҚ тізбегі бұзылады.

Бұзылатын негіздер орналасқан барлық учаскелер бойында тізбектің тек белгілі бөлімі бұзылып, ыдырауы толық емес болуы тиіс. Бұл кезде түрлі ұзындықтағы бір тізбекті ДНҚ-ның радиобелсенді белгімен белгіленген (көбі белгіленбеген) фрагменттер қоспасы түзіледі. Белгіленген фрагменттер ұзындығы тізбектің белгіленген ұштарының арасындағы нуклеотидтер санына және химиялық әсерге ұшыраған азоттық негіздердің орналасуына сәйкес келеді.
  • Келесі сатыда қоспадағы компоненттерді полиакриламидті гельде электрофорез көмегімен бөледі. Қысқа фрагменттер ұзын фрагменттерге қарағанда гель бойымен тез жылжиды. Электрофорезден кейін гельді рентген пленкасына орналастырады. Мұнда әр қоспада белгіленген фрагменттер ұзындығы бойынша бэндтер (сызықтар) байқалады. Белгілі реагентпен қандай азоттық негіз бұзылатынын біле отырып, радиоавтографты астынан үстіне қарай оқу арқылы белгіленген ұштан белгіленбеген ұш бағыты бойынша нуклеотидтердің оргаласу реттілігін анықтауға болады. Уотсон-Криктің азоттық негіздердің комплементарлы байланысу ережесі (А-Т және G-С) тізбектің бұрынғы комплементарлы реттілігін қайта қалпына келтіруге мүмкіндік береді.



Достарыңызбен бөлісу:
1   2   3   4   5   6   7   8
Loading...




©melimde.com 2020
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет
Сабақтың тақырыбы
Сабақтың мақсаты
рсетілетін қызмет
Сабақ тақырыбы
Жалпы ережелер
қызмет стандарты
бойынша жиынтық
жиынтық бағалау
ғылым министрлігі
бекіту туралы
Әдістемелік кешені
туралы хабарландыру
тоқсан бойынша
Сабақ жоспары
бағалауға арналған
Қазақстан республикасы
жиынтық бағалаудың
тоқсанға арналған
Жұмыс бағдарламасы
біліктілік талаптары
әкімінің аппараты
арналған жиынтық
туралы анықтама
Қазақстан республикасының
білім беретін
республикасы білім
мамандығына арналған
қойылатын жалпы
Конкурс туралы
жалпы біліктілік
мемлекеттік әкімшілік
жиынтық бағалауға
бағалау тапсырмалары
арналған әдістемелік
Қазақстан тарихы
жалпы конкурс
қатысушыларға қойылатын
арналған тапсырмалар
бағалаудың тапсырмалары
мерзімді жоспар
Қазақ әдебиеті
пәнінен тоқсанға
әдістемелік кешені
Мектепке дейінгі
ортақ біліктілік
Қазақстан облысы
қызмет регламенті
ткізу туралы
конкурс қатысушыларына
біліктілік талаптар
мамандығы бойынша

Loading...