Лабораторный практикум по общей микробиологии


Условия культивирования микроорганизмов

Loading...


бет9/20
Дата13.04.2020
өлшемі253.08 Kb.
1   ...   5   6   7   8   9   10   11   12   ...   20

Условия культивирования микроорганизмов

Для роста микроорганизмов существенное значение имеют не только состав питательной среды, но и такие факторы, как кислотность среды, аэрация, температура, свет, влажность. Развитие микроорганизмов воз- можно лишь в определенных пределах каждого фактора, причем для раз- личных групп микроорганизмов эти пределы часто не одинаковы.



Активная кислотность среды (рН) имеет решающее значение для роста многих микроорганизмов. Большинство бактерий лучше всего растет при рН, близком к 7,0, напротив, микроскопические грибы предпочитают слабокислые среды. Поэтому в приготовленных средах всегда следует оп- ределить значение рН. Значение рН сред может измениться в процессе стерилизации, поэтому после стерилизации его следует проверить и дове- сти до нужного, если это требуется, стерильными растворами кислоты или щелочи.

В процессе культивирования микроорганизмов кислотность пита- тельной среды часто меняется. Эти изменения могут быть результатом об- разования продуктов метаболизма или неравномерного потребления от- дельных компонентов среды. Поддержание определенного значения рН во время роста особенно важно для тех микроорганизмов, которые образуют в процессе жизнедеятельности кислоты, но не обладают устойчивостью к ним. К их числу относятся мол очно-кислые бактерии, а также многие псев- домонады.



Аэрация. По типу дыхания бактерии разделяют на 4 группы: а) обли- гатные, или строгие, аэробы, которые могут расти только при наличии ки- слорода; б) микроаэрофилы, которые нуждаются в кислороде, но лучше растут при парциальном давлении О2 меньшем, чем в воздухе; в) факуль- тативные анаэробы, которые способны расти как в присутствии, так и в от- сутствии молекулярного кислорода (например, некоторые дрожжи или эн- теробактерии в зависимости от наличия кислорода осуществляют аэробное дыхание или брожение; г) облигатные анаэробы (клостридии ботулизма, газовой гангрены, столбняка, бактероиды и др.) растут только на среде без кислорода, который для них токсичен. Неодинаковые потребности микро- организмов в свободном кислороде определяют различия и в способах их культивирования.

Температура. Интервалы температур, в которых возможен рост раз- личных микроорганизмов, заметно варьируются. У мезофилов, к которым относится большинство известных бактерий, температурный оптимум ле-

жит в интервале 25 - 37 °С. У термофилов он значительно выше - от 45 до 80 - 90 °С. Психрофилы хорошо развиваются в интервале температур 5 - 10 0С. Отклонения температуры от оптимальной неблагоприятно влияют на развитие микроорганизмов. Поэтому мезофильные микроорганизмы выращивают в термостатах или специальных термостатированных комна- тах, где с помощью терморегуляторов поддерживается соответствующая оптимальная температура.

Для выращивания психрофилов используют холодильные камеры.

Периодическое и непрерывное культивирование. Существуют две принципиально разные системы выращивания микроорганизмов в жидкой среде. В одном случае после инокуляции среды не происходит ни добавле- ния в нее, ни удаления каких-либо компонентов, кроме газовой фазы. Та- кая закрытая система культивирования носит название периодической и может поддерживать размножение клеток только в течение ограниченного времени, на протяжении которого меняются состав исходной среды и ок- ружающие условия.

Непрерывное (проточное) культивирование в отличие от периодиче- ского характеризуется постоянной подачей питательной среды со скоро- стью, равной скорости удаления культуры. При этом объем культуры в ферментере во времени не меняется. Одно из основных условий непрерыв- ного культивирования - хорошее перемешивание культуры в ферментере.



    1. Культивирование аэробных микроорганизмов



Культивирование на поверхности плотных и жидких сред. В этом случае микроорганизмы выращивают на поверхности плотной среды или в тонком слое жидкой среды, и кислород поступает к ним непосредственно из воздуха. При поверхностном культивировании важно увеличить пло- щадь соприкосновения среды с воздухом. Для этого среды наливают тон- ким слоем в посуду с широким дном - чашки Петри, колбы, матрацы и так далее, в жидких средах аэробные микроорганизмы часто растут, образуя на поверхности пленку. Факультативные анаэробы развиваются не только на поверхности, но и в толще жидкой среды, вызывая более или менее равно- мерное ее помутнение. Поверхностное культивирование микроорганизмов применяется как в лабораторных условиях, так и в промышленности.

Глубинное культивирование в жидких средах. Все способы глу- бинного культивирования аэробных микроорганизмов сводятся к увеличе- нию поверхности соприкосновения питательной среды с кислородом воз-

духа. Наиболее простой и широко распространенный в лабораторной прак- тике способ глубинного культивирования - выращивание на качалках, обеспечивающих встряхивание или вращение колб или пробирок со скоро- стью 100 - 200 об/мин и более. Чем больше скорость вращения, тем боль- ше соприкосновение среды с воздухом и выше насыщение ее кислородом.

Помимо перемешивания аэрировать культуру микроорганизмов можно продуванием через толщу среды стерильного воздуха. Этот способ часто используют в лабораторных исследованиях, но особенно широкое применение он нашел в промышленной микробиологии при получении биомассы и различных продуктов жизнедеятельности микроорганизмов - антибиотиков, ферментов, кислот.

    1. Культивирование анаэробных микроорганизмов

Выращивание анаэробных организмов более сложно, чем культиви- рование аэробов, так как соприкосновение клеток анаэробов с кислородом воздуха должно быть сведено к минимуму или даже полностью исключе- но. Для этого используют разные приемы, нередко комбинируя их друг с другом.



Выращивание в высоком слое среды. Это наиболее простой способ ограничения доступа воздуха к клеткам микроорганизмов. Жидкую среду наливают в сосуды для культивирования высоким слоем. Непосредственно перед посевом среду кипятят или прогревают на кипящей водяной бане 30 - 40 мин, затем быстро охлаждают, чтобы в ней не успел раствориться кислород воздуха, и вносят на дно посевной материал.

Выращивание в толще плотной среды. Этим приемом пользуются для получения изолированных колоний при выделении чистых культур или определении численности анаэробных микроорганизмов. Посевной материал вносят в расплавленную и остуженную до 48 - 50 °С агаризован- ную, желательно, осветленную среду, тщательно перемешивают и остав- ляют в пробирках или переливают стерильной пипеткой в другую стериль- ную посуду (трубки Бурри или чашки Петри). Поверхность среды в про- бирках или трубках Бурри заливают парафином. При использовании чашек Петри для выращивания анаэробов засеянную агаризованную среду нали- вают в крышку чашки и, после того как среда застынет, плотно прижима- ют к ее поверхности дно чашки. Зазор между стенками дна и крышки, где среда соприкасается с воздухом, заливают стерильным парафином.

Выращивание в анаэростатах. Анаэробные микроорганизмы мож- но выращивать в анаэростатах - вакуумных металлических камерах, снаб- женных манометром. Анаэростатом может служить обычный вакуумный стеклянный эксикатор. Из анаэростата откачивают воздух, а затем, как правило, заполняют его газовой смесью, состоящей из азота (90 - 80 %) и углекислоты (10 - 20 %), до давления порядка 67-Ю3 Па (500 мм рт. ст.). Избыточное давление исключает возможность диффузии кислорода воздуха.

Лабораторная работа № 13





Достарыңызбен бөлісу:
1   ...   5   6   7   8   9   10   11   12   ...   20
Loading...


©melimde.com 2020
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет
рсетілетін ызмет
Жалпы ережелер
ызмет стандарты
дістемелік кешені
бекіту туралы
туралы хабарландыру
біліктілік талаптары
кіміні аппараты
Конкурс туралы
жалпы біліктілік
ойылатын жалпы
мемлекеттік кімшілік
жалпы конкурс
білім беретін
Барлы конкурс
республикасы білім
бойынша жиынты
ызмет регламенті
ткізу туралы
конкурс атысушыларына
біліктілік талаптар
атысушыларына арнал
идаларын бекіту
Республикасы кіметіні
облысы кімдігіні
рсетілетін ызметтер
мемлекеттік ызмет
стандарттарын бекіту
Конкурс ткізу
мемлекеттік мекемесі
дістемелік сыныстар
Мектепке дейінгі
дебиеті маманды
дістемелік материалдар
білім беруді
ауданы кіміні
жалпы білім
конкурс туралы
мектепке дейінгі
рметті студент
облысы бойынша
мыссыз азаматтар
Мемлекеттік кірістер
дарламасыны титулды
Конкурс жариялайды
дістемелік кешен
мерзімді жоспар
разрядты спортшы
мелетке толма
ызметтер стандарттарын
директоры бдиев

Loading...