Лабораторный практикум по общей микробиологии


Окраска бактерий по Граму

Loading...


бет7/20
Дата13.04.2020
өлшемі253.08 Kb.
1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   ...   20

Окраска бактерий по Граму



Цель работы. Ознакомиться с техникой окраски бактерий по Граму.

Материалы и оборудование. Микроскоп, предметные стекла, бак- териологическая петля, спиртовка, чистые предметные стекла, столик для окрашивания препаратов, промывалка с водой, красящая бумага с кристал- лвиолетом или 1%-ный раствор кристаллвиолета или генцианвиолета, рас- твор Люголя, 96%-ный этанол, 0,1%-ный раствор фуксина или раствор Пфейфера, чистые культуры контрольных (с известным типом окраски) грамположительных и грамотрицательных бактерий и исследуемые мик- роорганизмы, иммерсионное масло для микроскопии.

Ход выполнения работы


  1. Приготовьте на одном предметном стекле три фиксированных мазка бактерий: а) контрольной грамотрицательной культуры с одного конца стекла; б) контрольной грамположительной культуры с другого кон ца стекла и в) исследуемой культуры в центре стекла. Мазки должны быть тонкими, клетки бактерий должны быть равномерно распределены на стекле, иначе окрашивание будет неправильным.

  2. Мазки окрашивают кристаллвиолетом в течение 2 мин.

  3. Кристаллвиолет смывают раствором Люголя и заливают мазки этим же раствором на 2 мин.

  4. Раствор Люголя смывают и окрашенные мазки обесцвечивают 96%-ным этиловым спиртом, погружая стекло с мазками в стакан со спир том на 30 с или промывая стекло спиртом из пипетки в течение 30 с.

  5. Тщательно промывают стекло с мазками водой (предпочтительно дистиллированной) и наносят на стекло 0,1%-ный раствор фуксина или раствор Пфейфера.

  6. Через 2 мин краску сливают, стекло тщательно промывают водой, высушивают фильтровальной бумагой и микроскопируют, пользуясь им мерсионным объективом. Грамположительные бактерии окрашиваются в сине-фиолетовый цвет, а грамотрицательные - в красный или розовый цвет дополнительного красителя (фуксина).

  7. Зарисуйте каждый препарат в альбом.

Лабораторная работа № 10 Экспресс-метод определения грам-типа микроорганизмов



Цель работы. Ознакомиться с техникой определения грам-типа мик-

роорганизмов.

Материалы и оборудование. Микроскоп, предметные стекла, бак- териологическая петля, спиртовка, чистые предметные стекла, чистые культуры контрольных (с известным типом окраски) грамположительных и грамотрицательных бактерий и исследуемые микроорганизмы, раствор 3%-ного КОН.

Ход выполнения работы


  1. На одно предметное стекло нанесите две капли раствора 3%-ного КОН. В первую каплю внесите бактериологической петлей контрольную грамположительную культуру, а во вторую - грамотрицательную кон трольную культуру.

  2. Тщательно перемешайте грамположительную культуру в первой капле с раствором КОН, через 5 - 10 с медленно приподнимите бактерио логическую петлю и убедитесь, что вязкость капли не изменилась, то есть слизь не образуется и реакция отрицательная.

  3. Тщательно перемешайте грамотрицательную культуру во второй капле с раствором КОН и через 5 - 10 с медленно приподнимите бактерио логическую петлю на высоту 2 - 3 см. Образовавшаяся слизь свидетельст вует о том, что КОН разрушает бактериальную клеточную стенку и ДНК

остается свободной (слизистое образование), т.е. проба положительная, а культура является грамотрицательной.

  1. Определите экспресс-методом грам-тип культур, предложенных преподавателем.

Лабораторная работа № 11 Окраска капсул бактерий по методу Гинса



Цель работы. Освоить окраску капсул бактерий по методу Гинса.

Материалы и оборудование. Микроскоп, предметные и покровные стекла, бактериологические петли, спиртовка, столик для окрашивания препаратов, промывалка с водой, полоски фильтровальной бумаги, черная тушь, смесь Никифорова, карболовый фуксин Циля, дистиллированная во- да, чистые культуры бактерий, готовые препараты капсульных форм бак- терий, иммерсионное масло для микроскопии.

Ход выполнения работы


  1. Приготовьте препарат в соответствии с описанием в теоретиче ской части.

  2. Просмотрите готовые препараты, предложенные преподавателем, с иммерсионной системой и зарисуйте их в альбом.

  3. Просмотрите приготовленный Вами препарат с иммерсионной системой и тоже зарисуйте его в альбом.



Лабораторная работа 12

Окраска спор бактерий



Цель работы. Освоить метод окраски спор бактерий.

Материалы и оборудование. Микроскоп, предметные стекла, бак- териологические петли, спиртовка, столик для окрашивания препаратов, промывалка с водой, 0,5%-ный водный раствор сафранина, раствор мети- ленового синего по Леффлеру или малахитовый зеленый, дистиллирован- ная вода, чистые культуры спорообразующих бактерий (Bacillus subtilis,

Bacillus cereus), готовые препараты споровых форм бактерий, иммерсион- ное масло для микроскопии.

Ход выполнения работы



  1. Приготовьте фиксированный мазок чистой культуры спорообра- зующих бактерий.

  2. Налейте на предметное стекло с мазком один из красителей: рас твор метиленового синего по Леффлеру или малахитового зеленого.

  3. Зажгите спиртовку и, держа стекло пинцетом над пламенем го релки, доведите краситель до кипения. По мере испарения красителя до бавляйте новые его порции. Продолжительность окраски трехкратная по 10-15 с.

  4. Затем стекло охладите, препарат тщательно промойте водой и на несите на мазок 0,5%-ный водный раствор сафранина и в течение 30 с до красьте препарат.

  5. Снова препарат промойте водой и высушите фильтровальной бу магой.

  6. Просмотрите с иммерсионной системой готовый препарат споро вой культуры, представленный преподавателем.

  7. Просмотрите с иммерсионной системой препарат споровой куль туры, полученный Вами.

  8. Все препараты зарисуйте в альбом. При правильном окрашивании вегетативные клетки окрашиваются в красный цвет, а споры в синий (при окрашивании раствором метиленового синего по Леффлеру) или в зеленый (при окрашивании раствором малахитового зеленого).





Достарыңызбен бөлісу:
1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   ...   20
Loading...


©melimde.com 2020
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет
рсетілетін ызмет
Жалпы ережелер
ызмет стандарты
дістемелік кешені
бекіту туралы
туралы хабарландыру
біліктілік талаптары
кіміні аппараты
Конкурс туралы
жалпы біліктілік
ойылатын жалпы
мемлекеттік кімшілік
бойынша жиынты
жалпы конкурс
білім беретін
Барлы конкурс
республикасы білім
ызмет регламенті
ткізу туралы
конкурс атысушыларына
біліктілік талаптар
атысушыларына арнал
Республикасы кіметіні
идаларын бекіту
облысы кімдігіні
рсетілетін ызметтер
мемлекеттік ызмет
дістемелік сыныстар
Конкурс ткізу
стандарттарын бекіту
мемлекеттік мекемесі
Мектепке дейінгі
дебиеті маманды
дістемелік материалдар
білім беруді
жалпы білім
ауданы кіміні
конкурс туралы
мектепке дейінгі
рметті студент
облысы бойынша
мерзімді жоспар
мыссыз азаматтар
Мемлекеттік кірістер
Конкурс жариялайды
дарламасыны титулды
дістемелік кешен
ызметтер стандарттарын
разрядты спортшы
мелетке толма
директоры бдиев

Loading...