Лабораторный практикум по общей микробиологии


К работе с автоклавом допускаются только подготовленные лица!

Loading...


бет2/20
Дата13.04.2020
өлшемі253.08 Kb.
1   2   3   4   5   6   7   8   9   ...   20

К работе с автоклавом допускаются только подготовленные лица!


Подготовка сред к стерилизации. При автоклавировании 3 - 5 % жидкости теряются в результате испарения, поэтому рекомендуется в при- готавливаемые среды добавлять сверх объема примерно 5% дистиллиро- ванной воды. Тогда после стерилизации среда (раствор) будет иметь тре- буемую концентрацию. Среды обычно стерилизуют в пробирках, колбах, бутылях. Емкости заполняют средой не более чем на половину их высоты, чтобы предотвратить смачивание пробок. Сосуды со средами закрывают ватными пробками с бумажными колпачками. Стеклянные, резиновые, корковые и другие пробки завертывают в двойной слой оберточной бумаги и стерилизуют привязанными к склянке, закрытой ватной пробкой.

Выбор режима автоклавирования. В микробиологической практике стерилизацию в автоклавах осуществляют при температуре в пределах 111-138 °С, т.е. от 0,5 до 2,5 атм. Температура ниже 111 °С не может счи- таться надежной; а выше 138 0С, как правило, не является необходимой, к тому же, чем выше давление пара, тем сложнее условия эксплуатации ав- токлава. Микробиологи чаще всего стерилизуют среды при 0,5 и 1 атм.

Температура и длительность автоклавирования питательных сред определяются, прежде всего, их составом, термоустойчивостью или термо- лабильностью компонентов. Такие легко разрушающиеся субстраты, как молоко или желатиновые среды, а также субстраты, содержащие сахара,

витамины (пивное сусло, соки, дрожжевой автолизат и др.) обычно стери- лизуют при 0,5 атм в течение 15 - 30 мин. Мясопептонные среды можно стерилизовать при 1,0 атм 20 мин. С трудом поддаются стерилизации в ав- токлаве различные порошки (например тальк) и вязкие жидкости (глице- рин, вазелиновое масло), поэтому их лучше стерилизовать в сушильных шкафах при 160 °С в течение 2 или 1 ч при 170 °С. В этом случае слой мас- ла или порошка в сосуде не должен превышать 1,5 см. После автоклавиро- вания среды для проверки стерильности выдерживают 2 - 3 сут в термо- стате при 30 0С. Если в средах обнаруживается рост микроорганизмов, их готовят заново.

Дробная стерилизация (тиндализация) и пастеризация


Тиндализация, дробная стерилизация, была предложена в 1877 г. Тиндалем. Она применяется для сред, портящихся под действием темпера- тур выше 100 °С. Тиндализацию осуществляют текучим паром а автоклаве с незавинченной крышкой или в аппарате Коха. Среды прогревают не- сколько раз по 10 - 15 мин. Между прогреваниями среды ставят в термо- стат при температуре 30 0 С н а 8 - 1 2 ч для прорастания жизнеспособных спор. Среды, не выдерживающие нагревания при 100 °С, прогревают более осторожно при 60 - 80 °С через каждые 8 - 1 2 ч 4 - 5 дней подряд.

Однократный прогрев материала при температуре ниже 100 0С из- вестен под названием пастеризация. Этот метод, предложенный Пасте- ром, предназначен для уничтожения только бесспоровых форм микроорга- низмов. Следовательно, в подавляющем большинстве случаев он не обес- печивает стерильности. Пастеризацию проводят при 60-80 0С 10 - 30 мин. Этот процесс используют в пищевой промышленности для обработки мо- лока, фруктовых соков, вина, пива и др.


Стерилизация фильтрованием


Фильтрованием стерилизуют синтетические среды строго опреде- ленного состава, которые содержат легкоразрушающиеся или летучие компоненты - витамины, аминокислоты (цистеин и цистин), белки, угле- воды, антибиотики и др. Фильтрование жидкостей осуществляют через мелкопористые материалы, легко адсорбирующие клетки микроорганиз- мов: асбест, целлюлозу, фарфор, каолин и др.

Стерилизующими фильтрами теоретически считают такие, размер пор которых не превышает 0,20 мкм. Наиболее широкое распространение в

микробиологической практике получили мембранные фильтры, которые в зависимости от величины пор применяют для фильтрования и стерилиза- ции. Для стерилизации используют отечественные фильтры фирм «Влади- пор», «Владисарт» с диаметром пор 0,20 мкм.

Плотные диски, изготовленные из смеси асбеста с целлюлозой, на- зываются фильтрами Зейтца. В зависимости от диаметра пор они обозна- чаются разными индексами. Стерилизующими являются СФ-3 и СФ-4.

Мембранные фильтры стерилизуют автоклавированием при 1 атм 15 мин или длительным кипячением.

Стерилизация стеклянной посуды. Основным способом стерилиза- ции стеклянной посуды является обработка ее сухим горячим воздухом при температуре не выше 180 ° в течение 1 - 3 ч (табл. 2). При этом поги- бают и вегетативные клетки, и споры микроорганизмов.

Стерилизацию осуществляют в специальных суховоздушных (сухо- жаровых) стерилизаторах и сушильных шкафах, приспособленных для стерилизации и обеспечивающих автоматическое поддержание необходи- мой температуры.

Таблица 2

Время, необходимое для стерилизации стеклянной посуды сухим жаром


Температура, °С

Время, мин

140

180

150

150

160

120

170

60

Посуда перед стерилизацией должна быть тщательно вымыта и за- вернута в бумагу для сохранения стерильности после прогревания. После этого еѐ загружают в стерилизатор (или в сушильный шкаф) не слишком плотно, чтобы обеспечить циркуляцию воздуха и равномерный надежный прогрев стерилизуемого материала. По окончании стерилизации шкаф не открывают до тех пор, пока температура в нем не упадет до 80 °С, так как при резком охлаждении иногда нарушается стерильность материала, а сильно нагретое стекло может растрескаться.



Стерилизация инструментов и приборов. Мелкие металлические ин- струменты - петли, иглы, пинцеты, ножницы, шпатели - стерилизуют про- каливанием в пламени (т.е. нагреванием докрасна) непосредственно перед использованием. На пламени кратковременно обжигают предметные и по- кровные стекла, стеклянные шпатели и палочки, фарфоровые ступки и пестики, горлышки колб, пробирок, бутылок, а также ватные пробки при посевах культур и разливе сред. В пламени погибают и вегетативные клет- ки, и споры микроорганизмов.

Шприцы лучше всего стерилизовать сухим жаром при 160 либо в собранном, либо в разобранном виде. В первом случае длительность сте- рилизации 75, во втором - 60 мин. Собранные шприцы вместе с иглой сте- рилизуют в пробирке, закрытой ватной пробкой, разобранные заворачива- ют в бумагу или ткань. Можно стерилизовать шприцы и в автоклаве при 1 атм в течение 15-20 мин. Автоклавируют их только в разобранном виде, иначе они повреждаются.

Стерилизация газообразными веществами. Аппаратуру, имеющую зеркальное, оптическое и радиоэлектронное оборудование, а также изделия из термолабильных пластмасс, например центрифужные пробирки, стери- лизуют газовым методом. Для газовой стерилизации применяются только те соединения, которые обладают спороцидными свойствами. Это оксид этилена, метилбромид, оксид пропилена, формальдегид, глютаральдегид, бета-пропиолактон, озон и др. Газовую стерилизацию проводят в специ- альных герметически закрывающихся аппаратах. Стерилизуемые объекты, помещаемые в камеру, упаковывают как при стерилизации в автоклаве или сушильном шкафу. При проведении газовой стерилизации строго соблю- дают правила работы с ядовитыми газообразными веществами.

Стерилизация облучением


Для стерилизации помещений, оборудования, некоторых медицин- ских принадлежностей, пищевых продуктов используют различные виды излучений: инфракрасное, ультрафиолетовое, рентгеновские лучи, а-, Р- и у-лучи радиоактивных элементов. Чаще других в микробиологической практике используют ультрафиолетовое облучение. Мощность ультрафио- лета измеряется в бактах. Доза УФ-излучения, губительная для различных видов микроорганизмов (кроме спор), составляет 5 мкб/см2.

Лабораторная работа № 1


Оборудование микробиологической лаборатории и подготовка посуды к стерилизации
Цель работы. Ознакомление с правилами работы в микробиологи- ческой лаборатории, с особенностями подготовки помещения, оборудова- ния и лабораторной посуды к работе с микроорганизмами.

Материалы и оборудование: термостат, центрифуги, автоклав, су- шильный шкаф, фильтры, бактерицидные лампы, пипетки, чашки Петри, шпатели, пробирки, колбы, предметные стекла, пергаментная бумага, вата, марля.

Ход выполнения работы. Ознакомьтесь с устройством и примене- нием основных приборов и оборудования микробиологической лаборато- рии. В соответствии с описанием этого процесса в теоретической части выполните следующие действия, а именно подготовьте к стерилизации:

  1. стеклянную посуду: пипетки, пробирки, колбы, чашки Петри;

  2. ватно-марлевые и резиновые пробки, металлические инструменты (ножницы, пинцеты, шприцы и иглы);

  3. фильтровальную установку «Владисарт» и мембранные фильтры.





  1. Достарыңызбен бөлісу:
1   2   3   4   5   6   7   8   9   ...   20
Loading...


©melimde.com 2020
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет
рсетілетін ызмет
Жалпы ережелер
ызмет стандарты
дістемелік кешені
бекіту туралы
туралы хабарландыру
біліктілік талаптары
кіміні аппараты
Конкурс туралы
жалпы біліктілік
ойылатын жалпы
мемлекеттік кімшілік
бойынша жиынты
жалпы конкурс
білім беретін
Барлы конкурс
республикасы білім
ызмет регламенті
ткізу туралы
конкурс атысушыларына
біліктілік талаптар
атысушыларына арнал
Республикасы кіметіні
идаларын бекіту
облысы кімдігіні
рсетілетін ызметтер
мемлекеттік ызмет
дістемелік сыныстар
Конкурс ткізу
стандарттарын бекіту
мемлекеттік мекемесі
Мектепке дейінгі
дебиеті маманды
дістемелік материалдар
білім беруді
жалпы білім
ауданы кіміні
конкурс туралы
мектепке дейінгі
рметті студент
облысы бойынша
мерзімді жоспар
мыссыз азаматтар
Мемлекеттік кірістер
Конкурс жариялайды
дарламасыны титулды
дістемелік кешен
ызметтер стандарттарын
разрядты спортшы
мелетке толма
директоры бдиев

Loading...