Лабораторный практикум по общей микробиологии


МЕТОДЫ АНАЛИЗА МИКРОФЛОРЫ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

Loading...


бет17/20
Дата13.04.2020
өлшемі253.08 Kb.
1   ...   12   13   14   15   16   17   18   19   20

МЕТОДЫ АНАЛИЗА МИКРОФЛОРЫ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

Микроорганизмы широко распространены в природе и обнаружива- ются во всех природных средах. Обнаружение и количественный учет микроорганизмов в объектах окружающей среды необходимы при санитар- но-гигиенических и экологических исследованиях для моделирования при- родных систем и разработки основ управления природными процессами.


Лабораторная работа № 24 Качественно- количественный учет микрофлоры почвы

Цель работы. Освоить метод посева проб почвы на питательные среды, метод определения количества мироорганизмов в почве и выделе- ния чистых культур бактерий из проб почвы.

Материалы и оборудование. Весы, ступка, резиновые перчатки, колба со стерильной дистиллированной водой, пипетки на 10 мл и 1 мл, стерильные пробирки, колба вместимостью 250 мл, чашки Петри с МПА, средой Эшби, средой Чапека.

Ход выполнения работы


    1. Приготовьте суспензию почвы. Для этого отвесьте 10 г почвы и перенесите навеску в стерильную ступку, добавьте 2 - 3 мл стерильной во ды и разотрите до пастообразного состояния.

    2. Полученную пробу почвы (10 г) перенесите в стерильную колбу, содержащую 90 мл стерильной воды, размешайте в течение 5 мин и дайте от стояться 30 мин. Это первое разведение исследуемой пробы почвы.

    3. Приготовьте ряд последующих 10-кратных разведений этой про бы в пробирках в зависимости от предполагаемой численности микроорга низмов в пробе. Для приготовления каждого последующего разведения ис пользуйте новую пипетку.

    4. Полученные разведения в объеме 0,1 мл посейте (на каждое раз ведение по 2 - 3 чашки):

а) на МПА для определения общего числа бактерий;

б) на среду Чапека для учета и выделения актиномицетов; в) на среду Эшби для учета и выделения азотобактера.

    1. Равномерно распределите каплю инокулята на поверхности агара, покачивая чашку, и оставьте на 30 мин для адсорбции при комнатной тем пературе.

    2. Засеянные чашки Петри через 30 минут переверните вверх дном и поместите в термостат при температуре 28 - 37 °С для выращивания мезо- фильной микрофлоры. Количество бактерий на МПА учитывайте через 1 - 5 сут, актиномицетов и азотобактера - через 5 - 7 сут.

    3. Учитывайте количество колоний следующим образом: дно чашки Петри маркером разделите на равные секторы, учтенные колонии отмечай те точками на стекле. Подсчитайте среднее число колоний на чашке и да лее пересчитайте количество микроорганизмов на 1 г воздушно-сухой поч вы по формуле


М=-

V 8.

Результаты работы внесите в табл. 10.

Таблица 10

Качественно-количественный учет микрофлоры почвы


Номер

пробы

Общее число бактерий

Количество в 1 г почвы







актиномицетов

азотобактера

1










2










Лабораторная работа № 25



Количественный учет бактерий в пробах воды. Определение титра и индекса кишечной палочки



Цель работы. Освоить методы отбора проб воды, их посева и опре- деления бактериальной загрязненности воды.

Материалы и оборудование. Микроскоп, предметные стекла, бак- териологические петли, спиртовка, стерильные чашки Петри с МПА и сре- дой Эндо, исследуемые пробы воды, столик для окрашивания препаратов, промывалка с водой, красители для окраски по Граму, установка вакуум- ной фильтрации «Владисарт», мембранные фильтры с диаметром пор

    1. мкм, системы индикаторные бумажные (СИБ), для идентификации эн- теробактерий, производства Нижегородского предприятия бактерийных препаратов, стерильный физиологический раствор; термостат с температу- рой 37 °С.

Ход выполнения работы


      1. Отберите пробы воды в стерильные флаконы или колбы в объеме 50 или 100 мл непосредственно перед началом занятия: а) пробу водопро водной воды; б) пробу из отрытого водоема (ручей, ключ, пруд). До начала занятия (посева) пробы можно хранить не более 3 ч при температуре не выше 4 °С.

      2. Приготовьте ряд последующих 10-кратных разведений отобран ных проб в пробирках, в зависимости от предполагаемой численности микроорганизмов в пробе. Для приготовления каждого последующего раз ведения используйте новую пипетку.

      3. Полученные разведения в объеме 0,1 мл посейте (на каждое раз ведение по 2 - 3 чашки):

а) на МПА для определения общего числа бактерий;

б) на среду Эндо для учета БГКП (бактерии группы кишечной па лочки или энтеробактерии).



      1. В чашки Петри с МПА и средой Эндо внесите по 0,1 мл послед него и предпоследнего разведений, равномерно распределите каплю ино- кулята на поверхности агара, покачивая чашку, и оставьте на 30 мин для адсорбции при комнатной температуре.

      2. Засеянные чашки Петри через 30 мин переверните вверх дном и поместите в термостат при температуре 28 - 37 °С для выращивания мезо- фильной микрофлоры. Количество бактерий учитывайте через 1 - 2 сут.

      3. Водопроводную воду исследуйте также методом мембранных фильтров, которые простерилизуйте кипячением в течение 30 мин. Фильт ровальную установку «Владисарт» подготовьте к работе вместе с препода вателем.

      4. Профильтруйте пробу водопроводной воды в объеме 100 мл. Сте рильным пинцетом фильтр аккуратно перенесите в чашку Петри с МПА (для определения общего числа бактерий) и средой Эндо и поместите в термостат с температурой 37 °С.

      5. Учитывайте количество колоний следующим образом: дно чашки Петри маркером разделите на равные секторы, учтенные колонии отмечай те точками на стекле. Для определения титра подсчитайте среднее число колоний на чашке и умножьте на разведение.

      6. Для подтверждения принадлежности к БГКП из колоний, вырос ших на среде Эндо, приготовьте фиксированные мазки, окрасьте их по Граму, промикроскопируйте. Грамотрицательные бактерии протестируйте по биохимическим свойствам с системой индикаторной бумажной (СИБ) для идентификации энтеробактерий.

      7. Подсчитайте количество колоний кишечной палочки на 1 мл воды по формуле (см. с. 47).

      8. Результаты запишите в табл. 11.

Таблица 11

Количественный учет бактерий в пробах воды



Номер пробы

Общее число бактерий в 1 мл воды

Коли-титр

1















Лабораторная работа № 26 Определение бактериальной обсемененности воздуха



Цель работы. Освоить определение бактериальной обсемененности воздуха методами оседания и фильтрования.

Материалы и оборудование. Стерильные чашки Петри с МПА, ус- тановка вакуумной фильтрации «Владисарт», мембранные фильтры с диа- метром пор 0.2 мкм; термостат с температурой 37 0С.


Достарыңызбен бөлісу:
1   ...   12   13   14   15   16   17   18   19   20
Loading...


©melimde.com 2020
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет
рсетілетін ызмет
Жалпы ережелер
ызмет стандарты
дістемелік кешені
бекіту туралы
туралы хабарландыру
біліктілік талаптары
кіміні аппараты
Конкурс туралы
жалпы біліктілік
ойылатын жалпы
мемлекеттік кімшілік
бойынша жиынты
жалпы конкурс
білім беретін
Барлы конкурс
республикасы білім
ызмет регламенті
ткізу туралы
конкурс атысушыларына
біліктілік талаптар
атысушыларына арнал
Республикасы кіметіні
идаларын бекіту
облысы кімдігіні
рсетілетін ызметтер
мемлекеттік ызмет
дістемелік сыныстар
Конкурс ткізу
стандарттарын бекіту
мемлекеттік мекемесі
Мектепке дейінгі
дебиеті маманды
дістемелік материалдар
білім беруді
жалпы білім
ауданы кіміні
конкурс туралы
мектепке дейінгі
рметті студент
облысы бойынша
мерзімді жоспар
мыссыз азаматтар
Мемлекеттік кірістер
Конкурс жариялайды
дарламасыны титулды
дістемелік кешен
ызметтер стандарттарын
разрядты спортшы
мелетке толма
директоры бдиев

Loading...