Лабораторный практикум по общей микробиологии


КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ УЧЕТ МИКРООРГАНИЗМОВ

Loading...


бет12/20
Дата13.04.2020
өлшемі253.08 Kb.
1   ...   8   9   10   11   12   13   14   15   ...   20

КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ УЧЕТ МИКРООРГАНИЗМОВ

Методы определения количества микроорганизмов могут быть пря- мыми (подсчет клеток под микроскопом, взвешивание на весах) или кос- венными, посредством которых определяют число колоний микроорганиз- мов, выросших после высева суспензии клеток на питательную среду, рас- сеяние или поглощение суспензией клеток света, содержание в ней белка и др. Выбор метода зависит от целей исследования, свойств питательной среды или субстрата, а также особенностей роста и морфологии микроор- ганизмов.



    1. Подсчет клеток микроорганизмов под микроскопом

Подсчитать клетки микроорганизмов под микроскопом можно ис- пользуя счетные камеры, капилляры Перфильева, препараты фиксирован- ных и окрашенных клеток, приготовленные на предметных стеклах или мембранных фильтрах. Перечисленные методы позволяют определить общее количество клеток в единице объема. Следует помнить, что под- считывают все клетки, как живые, так и мертвые.



Подсчет клеток в счетных камерах. Этот метод рекомендуется использовать для подсчета крупных объектов - дрожжей, одноклеточных водорослей, конидий грибов и некоторых относительно крупных бактерий. Обычно используют камеру Горяева - Тома, хотя можно применять и дру- гие счетные камеры. При работе с камерой необходимо соблюдать опреде- ленный порядок ее заполнения. Вначале углубление с сеткой покрывают специальным шлифованным покровным стеклом и, слегка прижимая, сме- щают покровное стекло в противоположные стороны до появления колец Ньютона. Эти кольца указывают на то, что покровное стекло притерто к сторонам камеры. Только при таком условии объем взвеси микроорганиз- мов, находящийся в камере, соответствует расчетному. После этого камеру заполняют исследуемой суспензией микроорганизмов. Суспензию вносят через бороздку камеры капилляром или пипеткой. Подсчет клеток реко- мендуется начинать через 3 - 5 мин после заполнения камеры, чтобы клет-

43

ки осели и при микроскопировании были видны в одной плоскости. Под- вижные клетки перед заполнением камеры убивают нагреванием или сус- пендированием в 0,5%-ном водном растворе формалина.

Число клеток подсчитывают с объективом 8х или 40х. С иммерсион- ным объективом работать нельзя, так как его фокусное расстояние меньше толщины стекла камеры. Обычно подсчитывают клетки микроорганизмов в 10 больших или 20 маленьких квадратах сетки, перемещая последние по диагонали. Учитывают все клетки, лежащие в квадрате сетки, а также клетки, пересекающие верхнюю и правую стороны квадрата. При подсчете количество клеток в большом квадрате не должно превышать 20, а в малом - 10, в противном случае исходную суспензию разводят водопроводной во- дой. Для получения достоверного результата общее число подсчитанных клеток микроорганизмов должно быть не менее 600. Подсчет клеток по- вторяют 3 - 4 раза, каждый раз заново монтируя камеру и заполняя ее ис- следуемой взвесью микроорганизмов. Это обеспечивает большую точ- ность, чем подсчет 600 клеток при однократном монтаже камеры. Количе- ство клеток в 1 мл исследуемой суспензии вычисляют по формуле

хл АЛ°3

М = и,

hS где

М- число клеток в 1 мл суспензии;



А - среднее число клеток в 1 квадрате сетки; h - высота камеры, мм; . S - площадь 1 квадрата сетки, мм2;

103 - коэффициент перевода кубических сантиметров в кубические миллиметры;



п - разведение исследуемой суспензии.

Подсчет клеток на фиксированных окрашенных мазках (метод Виноградского-Брида). Преимущество метода заключается в том, что фик- сированные окрашенные препараты хорошо сохраняются, поэтому подсчет можно проводить в удобное для исследователя время. Для этого хорошо обезжиренное предметное стекло помещают на миллиметровую бумагу, на которой отмечен прямоугольник площадью 4 или 6 см2. Затем на стекло из микропипетки наносят точно измеренный объем исследуемой суспензии (0,01, 0,02 или 0,03 мл) и каплю 0,03 - 0,1%-ного водного раствора агара. Нанесенную суспензию равномерно распределяют петлей по площади, от- меченной на миллиметровой бумаге. Препарат подсушивают на воздухе, фиксируют 10-20 мин 96%-ным спиртом и окрашивают 1 - 2 мин фукси- ном Циля или любым другим красителем. Краситель сливают, препарат

44

промывают, последовательно погружая стекло в 4 - 5 стаканов с водой (промывать препарат под струѐй водопроводной воды не следует), и вы- сушивают на воздухе. В таком виде препараты хорошо сохраняются.

Количество клеток подсчитывают с иммерсионным объективом в квадратах окулярной сетки, которую помещают в окуляр между собира- тельной и глазной линзами. При отсутствии сетки подсчитывают число клеток в поле зрения микроскопа. Чтобы результат был достоверным, клетки микроорганизмов рекомендуется подсчитывать в 50 - 100 полях зрения. Общее количество подсчитанных клеток не должно быть менее 600. Количество клеток микроорганизмов, содержащихся в 1 мл исследуе- мого субстрата, вычисляют по формуле

»• AS

М = п,

sV где М -

количество клеток в 1 мл исследуемого субстрата;



А - среднее число клеток в квадрате окулярной сетки (поле зрения);

s - площадь квадрата окулярной сетки (поля зрения), мкм2;

V - объем нанесенной на стекло суспензии, мл;

S - площадь приготовленного мазка, мкм ;

п - разведение исследуемого субстрата.

Подсчет клеток на мембранных фильтрах. Этот метод применяют при определении количества микроорганизмов в различных водоемах, при санитарно-бактериологических и некоторых других исследованиях. Фильтрование пробы определенного объема (от нескольких миллилитров до десятков литров) позволяет сконцентрировать на поверхности фильтра содержащиеся в пробе клетки микроорганизмов. Затем их окрашивают и подсчитывают.



    1. Достарыңызбен бөлісу:
1   ...   8   9   10   11   12   13   14   15   ...   20
Loading...


©melimde.com 2020
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет
рсетілетін ызмет
Жалпы ережелер
ызмет стандарты
дістемелік кешені
бекіту туралы
туралы хабарландыру
біліктілік талаптары
кіміні аппараты
Конкурс туралы
жалпы біліктілік
ойылатын жалпы
мемлекеттік кімшілік
жалпы конкурс
білім беретін
Барлы конкурс
республикасы білім
бойынша жиынты
ызмет регламенті
ткізу туралы
конкурс атысушыларына
біліктілік талаптар
атысушыларына арнал
идаларын бекіту
Республикасы кіметіні
облысы кімдігіні
рсетілетін ызметтер
мемлекеттік ызмет
стандарттарын бекіту
Конкурс ткізу
мемлекеттік мекемесі
дістемелік сыныстар
Мектепке дейінгі
дебиеті маманды
дістемелік материалдар
білім беруді
ауданы кіміні
жалпы білім
конкурс туралы
мектепке дейінгі
рметті студент
облысы бойынша
мыссыз азаматтар
Мемлекеттік кірістер
дарламасыны титулды
Конкурс жариялайды
дістемелік кешен
мерзімді жоспар
разрядты спортшы
мелетке толма
ызметтер стандарттарын
директоры бдиев

Loading...