Лабораторный практикум по общей микробиологии

Loading...


бет1/20
Дата13.04.2020
өлшемі253.08 Kb.
  1   2   3   4   5   6   7   8   9   ...   20

Федеральное агентство по образованию
Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования

Владимирский государственный университет




О.В. ПРУНТОВА, О.Н. САХНО


ЛАБОРАТОРНЫЙ ПРАКТИКУМ ПО ОБЩЕЙ МИКРОБИОЛОГИИ

Владимир 2005



УДК 576.8

ББК 28.4 П85

Рецензенты: Кандидат биологических наук,

зав. кафедрой ботаники Владимирского государственного педагогического университета В.Б. Кулиш


Доктор ветеринарных наук, зав. лабораторией микробиологии Федерального Центра охраны здоровья животных г. Владимир

В.С. Русалеев


Печатается по решению редакционно-издательского совета Владимирского государственного университета

Прунтова, О.В. Лабораторный практикум по общей микробиоло-П85 гии / О. В. Прунтова, О. Н. Сахно ; Владим. гос. ун-т. - Владимир : Изд- во ВлГУ, 2005. - 76 с. - ISBN 5-89368-586-5.
Содержит работы, которые позволяют студентам приобрести навыки работы с микроорганизмами, изучить их морфологию, культуральные, физиологические и био- химические свойства, освоить методы микробиологического исследования объектов окружающей среды.

Предназначено для студентов специальностей «Биология» (011600), «Экология» (013100), «Охрана окружающей среды и рациональное использование природных ре- сурсов» (320700).

Табл. 11. Библиогр. 13 назв.

УДК 576.8

ББК 28.4

ISBN 5-89368-586-5 © Владимирский государственный университет, 2005

ПРЕДИСЛОВИЕ


Основное внимание в предлагаемом издании уделено освоению сту- дентами методов микроскопирования, посевов и пересевов (получению чистых культур) микроорганизмов, культивирования микроорганизмов на плотных и жидких питательных средах, определения их количества в про- бах из объектов окружающей среды, идентификации микроорганизмов по биохимическим свойствам.

Практикум содержит 29 лабораторных работ по основным разделам общей микробиологии и построен в соответствии с действующей про- граммой по этому предмету.

Перед каждой работой помещен перечень оборудования и материа- лов, необходимых для ее проведения. После каждого раздела даны кон- трольные вопросы, а в конце работы - тесты для проверки усвоения мате- риала.

В качестве объектов исследования при выполнении работ предлага- ется использовать культуры микроорганизмов, широко распространенных в окружающей среде, которые участвуют в биогеохимических превраще- ниях веществ в природе и используются в биотехнологических процессах.

Практикум не повторяет работы в изданных ранее учебных пособиях по микробиологии, а содержит задания, позволяющие студентам приобре- сти навыки работы с микроорганизмами, изучить их морфологию, культу- ральные, физиологические и биохимические свойства, освоить методы микробиологического исследования объектов окружающей среды.

В руководстве представлены некоторые работы, выходящие за пре- делы программы, которые могут быть использованы в исследованиях по курсовым и дипломным работам студентов, а также при проведении заня- тий по курсам «Экология бактерий», «Организмы и среда», «Физиология растений».


  1. ОБЩАЯ ЧАСТЬ 1.



Микробиологическая лаборатория и правила работы в ней
В учебных заведениях не разрешается работать с живыми патоген- ными микроорганизмами. Необходимо помнить, что при посеве сапрофит- ных микроорганизмов из окружающей среды случайно может быть внесе- на и патогенная микрофлора. Кроме того, работа с сапрофитными бакте- риями в ряде случаев требует абсолютной стерильности для получения на- дежных результатов опыта. В микробиологической практике используют главным образом чистые культуры микроорганизмов. Культуру, содержа- щую микроорганизмы одного вида, называют чистой. Если в культуре со- держится более одного вида микроорганизмов, она носит название сме- шанной.

Микробиологическая лаборатория включает ряд помещений, где проводят работу с микроорганизмами или подготовку к ней. Поверхность столов и пол всех лабораторных помещений покрывают легко моющимся материалом. В основном рабочем помещении находятся аппаратура, посу- да и реактивы. Столы имеют подводку электроэнергии и снабжены газо- выми горелками. Кроме основного рабочего помещения лаборатория имеет стерилизационную, где размещены автоклавы и сушильные шкафы, бокс, моечную, холодильную комнату, термостаты или термостатированные комнаты для выращивания микроорганизмов, помещение для хранения культур и т.д.



Подготовка микробиологической лаборатории к работе

Для того чтобы снизить количество микроорганизмов в воздухе и на различных поверхностях, в лабораторных помещениях применяют различ- ные способы дезинфекции. Слово «дезинфекция» означает обеззаражива- ние, то есть уничтожение возбудителей инфекционных болезней на объек- тах внешней среды.



Пол, стены и мебель в микробиологической лаборатории протирают растворами различных дезинфицирующих веществ, в качестве которых чаще всего используют 2 - 3%-ный раствор соды (бикарбоната натрия), 3 - 5%-ный раствор фенола (карболовой кислоты) или лизола (препарат фенола с добавлением зеленого мыла), 0,5 - 3%-ный водный раствор хло- рамина и некоторые другие дезинфектанты. 4

Воздух в лаборатории наиболее просто дезинфицировать проветри- ванием. Продолжительная вентиляция помещения через форточку (не ме- нее 30-60 мин) приводит к резкому снижению количества микроорганиз- мов в воздухе, особенно при значительной разнице в температуре между наружным воздухом и воздухом помещения. Более эффективный и наибо- лее часто применяемый способ дезинфекции воздуха - облучение ультра- фиолетовыми лучами с длиной волны от 200 до 400 нм. Ультрафиолетовые лучи обладают слабой проникающей способностью, поэтому в зависимо- сти от степени загрязненности воздуха для его стерилизации требуется об- лучение от 30 мин до нескольких часов. Необходимо иметь в виду, что ультрафиолетовые лучи могут вызвать тяжелые поражения глаз. По- этому при работе с бактерицидными лампами нужно строго следить за тем, чтобы ни прямые, ни отраженные ультрафиолетовые лучи не попадали в глаза. В небольших помещениях при включенной бактерицидной лам- пе находиться нельзя.

Рабочее место, где непосредственно проводится работа с культура- ми микроорганизмов, требует особенно тщательной обработки. Рабочий стол следует дезинфицировать не только до начала работы, но и после ее окончания. Для протирания поверхности стола можно использовать рас- творы лизола и хлорамина, а также 70%-ные (по объему) растворы изопро- пилового или этилового спиртов. В лаборатории не разрешается курить, хранить и употреблять еду, напитки, жевательную резинку. Работать следует в халатах.

Правила работы с культурами микроорганизмов

В лаборатории микроорганизмы выращивают в питательных средах, которые разливают в пробирки, колбы, матрацы и чашки Петри. Внесение микроорганизмов в стерильную среду называется посевом, или инокуля- цией. Перед посевом следует тщательно надписать на пробирке (колбе или чашке Петри) название микроорганизма и дату посева. Надпись делают маркером на стекле или на наклеенной этикетке. Клетки микроорганизмов для посева или приготовления препаратов берут бактериологической пет- лей, если микроорганизмы выращены на плотной среде. В том случае, ко- гда пересевают культуры микроорганизмов, выросшие в жидкой питатель- ной среде, пользуются стерильной пипеткой. Использованную пипетку следует немедленно перенести в дезинфицирующий раствор, например 3 - 5%-ный водный раствор фенола или 2%-ный раствор хлорамина, не ка- саясь ею окружающих предметов.

Все манипуляции при посеве следует проводить около пламени го- релки (но не в пламени). Нельзя делать резкие движения и ходить около лица, работающего с чистой культурой, так как движение воздуха увели- чивает вероятность случайного ее загрязнения.


  1. Методы стерилизации питательных сред и посуды Стерилизация является одним из важнейших и необходимых прие-

мов в микробиологической практике. Слово «стерилизация» в переводе с латинского означает обеспложивание. В практической работе под стерили- зацией понимают методы, применяемые для уничтожения всех форм жиз- ни как на поверхности, так и внутри стерилизуемых объектов. Различают термическую и холодную стерилизацию. Способы термической стерили- зации: прокаливание в пламени и обжигание, сухожаровая стерилизация (горячим воздухом), стерилизация насыщенным паром под давлением (ав- токлавирование), дробная стерилизация (тиндализация), кипячение. Мето- ды холодной стерилизации: стерилизация фильтрованием, газообразными средствами, ультрафиолетовыми лучами и другими видами излучений.

Возможность и целесообразность применения того или иного спосо-

ба определяется в первую очередь физико-химическими свойствами мате- риала, подлежащего стерилизации, а иногда и целью исследования.

Стерилизация питательных сред насыщенным паром под давле- нием (автоклавирование)


Совместное действие высокой температуры и давления пара обеспе- чивает особую эффективность данного способа (табл. 1).

Таблица 1



Температура насыщенного пара при разных давлениях


Давление

Температура,

°С

нормальное, атм

кПа

1,0

101,32

100

1,5

151,98

111

2,0

202,65

121

2,5

251,20

128

3,0

299,75

134

При этом погибают и вегетативные клетки, и споры микроорганиз- мов. Установлено, что споры большинства микроорганизмов не выдержи- 6

вают и 5-минутную экспозицию в насыщенном паре при 121 °С. Стерили- зацию текучим паром под давлением осуществляют в автоклавах. Авто- клав представляет собой металлический двустенный резервуар, способный выдерживать высокое давление, в который помещают стерилизуемый ма- териал на специальную подставку. Предметы следует размещать не слиш- ком плотно, так как пар должен проходить между ними, иначе они не на- греваются до нужной температуры и могут остаться нестерильными. По окончании времени стерилизации автоклав открывают, когда давление в нем сравняется с атмосферным. Преждевременное открывание крана автоклава недопустимо, так как перегретые среды при резком снижении давления сразу же бурно закипают, смачивают и даже иногда выталкивают ватные пробки, что нарушает впоследствии стерильность материала.



Достарыңызбен бөлісу:
  1   2   3   4   5   6   7   8   9   ...   20
Loading...


©melimde.com 2020
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет
рсетілетін ызмет
Жалпы ережелер
ызмет стандарты
дістемелік кешені
бекіту туралы
туралы хабарландыру
бойынша жиынты
біліктілік талаптары
кіміні аппараты
Конкурс туралы
жалпы біліктілік
ойылатын жалпы
мемлекеттік кімшілік
білім беретін
жалпы конкурс
Барлы конкурс
республикасы білім
ызмет регламенті
ткізу туралы
конкурс атысушыларына
біліктілік талаптар
атысушыларына арнал
дістемелік сыныстар
Республикасы кіметіні
идаларын бекіту
облысы кімдігіні
мемлекеттік ызмет
рсетілетін ызметтер
мемлекеттік мекемесі
стандарттарын бекіту
Конкурс ткізу
Мектепке дейінгі
дебиеті маманды
білім беруді
жалпы білім
дістемелік материалдар
мектепке дейінгі
ауданы кіміні
мерзімді жоспар
конкурс туралы
облысы бойынша
рметті студент
мыссыз азаматтар
Мемлекеттік кірістер
дарламасыны титулды
Конкурс жариялайды
дістемелік кешен
разрядты спортшы
мелетке толма
ызметтер стандарттарын
аласы кіміні

Loading...