Биологиялық талдау әдістері Дәріс жоспары



Дата20.05.2022
өлшемі12.77 Kb.
#256572
Байланысты:
перевод 1
Жазғы мектеп-5 сынып

Дәріс 27
Биологиялық талдау әдістері
Дәріс жоспары:
1 Биологиялық талдау әдістері (БМА): мәні, айрықша белгілері
2. Заттарды анықтауда биологиялық тәсілді жүзеге асыру.


1. Қазіргі ғылымға тән қасиет – ғылымның әртүрлі салаларының түйіскен жерінде жаңа әдістерді жасау. Мысал ретінде биологияның микробиология, зоология, ботаника, аналитикалық химия сияқты салаларының жетістіктеріне негізделген талдаудың биологиялық әдістерін жасауды келтіруге болады. Биологиялық әдістер өмір сүру үшін – тірі жандардың өсуі, көбеюі және қызмет етуі, қатаң анықталған химиялық құрамды орта қажет екендігіне негізделген. Бұл құрам өзгергенде, мысалы, құрамдас қоректік ортадан шығарылғанда немесе қосымша (анықталған) қосылыс енгізілгенде, организм біраз уақыттан кейін, кейде дерлік дереу тиісті жауап сигналын береді. Организмнің жауап сигналының сипаты немесе қарқындылығы (индикаторлық сигнал деп аталады) мен қоршаған ортаға енгізілген немесе қоршаған ортадан шығарылған компонент мөлшері арасындағы байланысты орнату оны анықтау немесе анықтау үшін қызмет етеді. Биологиялық әдістердегі аналитикалық көрсеткіштер әртүрлі тірі организмдер, олардың мүшелері мен ұлпалары, физиологиялық қызметтері, биохимиялық реакциялар және т.б. Биологиялық әдістер индикатор организмнің жауап сигналын тіркеудің өзіндік тәжірибелік техникасымен, құрал-жабдықтарымен және әдісімен сипатталады. Тірі организмдерге қатысты барлық заттарды: 1) өмірлік, 2) улы, 3) физиологиялық белсенді емес деп бөлуге болады. Әлбетте, тек алғашқы екі жағдайда ғана организмнің салыстырмалы түрде жылдам реакциясын күтуге болады (аналитикалық сигнал). Физиологиялық белсенді емес заттар ұзақ мерзімді нәтиже бере алады немесе организмдердің өмірлік процестерінің ингибиторларымен немесе стимуляторларымен әрекеттесу реакцияларының нәтижесінде белсенді күйге ауысуы мүмкін. Бір немесе басқа индикатор организмді таңдау талданатын заттың табиғатына байланысты. Қатты, сұйық немесе ауа ортасының химиялық құрамының өзгеруіне оның жауап сигналы өте әртүрлі болуы мүмкін: мінез-құлық сипатының өзгеруі (мінез-құлық реакциялары); өсуді ынталандыру немесе басу, биомассаның жинақталуы; пигментацияның, қан құрамының, органдар мен тіндердің биоэлектрлік белсенділігінің өзгеруі; ас қорыту жүйесінің, тыныс алудың, көбеюдің функцияларын бұзу; ағзадағы патологиялық-анатомиялық өзгерістер. Анықталған қосылыстың индикаторлық организмге әсер ету тиімділігінің жалпыланған көрсеткіші тірі қалу немесе өлім болып табылады. Барлық аталған немесе индикатор организміндегі кез келген басқа өзгерістер жеке немесе біріктірілген түрде физикалық-химиялық әдіспен өлшенетін немесе визуалды түрде бағаланатын аналитикалық сигнал ретінде пайдаланылуы мүмкін. Анықталатын зат пен индикатор организмнің өзара әрекеттесу механизмі өте күрделі, бұл өзара әрекеттесу схемалық түрде келесі схема арқылы көрсетілуі мүмкін: Талдаудың соңғы сатысында жауап сигналын жазу әдісін таңдау зерттеудің мақсатына да байланысты. талдау және зерттелетін зат пен индикатор организмнің өзара әрекеттесу механизмі мен дәрежесі туралы. Организм неғұрлым күрделі болса, оның өмірлік функцияларының саны аналитикалық көрсеткіштер ретінде пайдаланылуы мүмкін, соғұрлым биологиялық талдау әдістерінің ақпараттық мазмұны жоғары болады. Бір затқа индикаторлық организмнің жауап сигналы соңғысының концентрациясына байланысты: төмен концентрациялар әдетте ағзаның өмірлік процестерін ынталандырады, ал жоғары концентрациялар депрессияға ұшыратады. Биологиялық белсенді заттардың концентрациясының айтарлықтай артуы өлімге әкеледі. Анықталған құрамның диапазоны, қосылыстарды анықтау шегі физика-химиялық және биологиялық факторларға байланысты: химиялық қосылыстардың ағзаға әсер ету бағыты мен ұзақтығы; температура, ортаның рН; индикаторлық организмнің ұйымдасу деңгейі, оның жеке, жас, жыныс ерекшеліктері. Анықталған қосылыс Мембраналық Жасуша Ағзалар жүйесі Ағза Экологиялық жүйе Микроорганизмдер, омыртқасыздар және омыртқалылар индикатор организмдер ретінде әрекет ете алады. Мақалада талдауда осы индикаторлық организмдерді пайдалануды қарастырамыз. Сонымен бірге, соңғы жылдары өсімдік көрсеткіштері ғалымдардың назарын көбірек аударып келе жатқанын айта кеткен жөн. Мәселен, мысалы, топырақтағы ауыр металдардың (қорғасын, кадмий) мөлшерін өсімдік тамырларының өсу қарқынына, салмағының өсуіне, тармақталуына қарай бағалауға болады.
2. Дәрілік заттардың сапасын биологиялық бағалау әдетте фармакологиялық әсерінің немесе уыттылығының күші бойынша жүргізіледі. Физикалық, химиялық немесе физико-химиялық әдістер дәрілік заттың тазалығы немесе уыттылығы туралы қорытынды жасамағанда немесе препаратты дайындау әдісі белсенділіктің тұрақтылығына кепілдік бермеген кезде (мысалы, антибиотиктер) биологиялық әдістер қолданылады. .
Биологиялық зерттеулер жануарларға (мысықтар, иттер, қояндар, бақалар және т.б.), жеке оқшауланған мүшелер (жатыр мүйізі, терінің бір бөлігі), жасушалардың жеке топтары (қан жасушалары), сондай-ақ микроорганизмдердің кейбір штаммдары бойынша жүргізіледі. . Дәрілік заттардың белсенділігі әсер ету бірліктерімен (ЭД) көрсетіледі.
Құрамында жүрек гликозидтері бар препараттарды биологиялық бақылау. SP XI сәйкес, жүрек гликозидтері бар дәрілік өсімдік материалдары мен одан алынған препараттардың белсенділігін биологиялық бағалау, атап айтқанда, түлкі (күлгін, ірі гүлді және жүнді), адонис, алқап лалагүлі, строфант, сұр сары ауру болып табылады. орындалған. Сынақтар бақа (ICE), мысық (CED) және көгершін (GED) әрекет бірліктерін орнату, бақа, мысық және көгершін бойынша жүзеге асырылады. Бір ICE стандартты үлгінің дозасына сәйкес келеді, ол эксперименттік жағдайларда эксперименттік стандартты бақалардың көпшілігінде (салмағы 28-33 г еркектер) жүректің систолалық тоқтауын тудырады. Бір KED немесе GED мысық немесе көгершіндегі жүректің систолалық тоқтауына әкелетін жануардың немесе құстың 1 кг салмағына стандартты үлгінің немесе сынақ препаратының дозасына сәйкес келеді. Өсімдік материалдары немесе құрғақ концентраттар сыналған жағдайда ED мазмұны зерттелетін препараттың 1,0 г есептеледі; бір таблеткада немесе сұйық дәрілік нысандар сыналатын болса, 1 мл.
Уыттылық сынағы. Бұл бөлімде GF XI, №. 2 (182 б.), SP X-мен салыстырғанда дәрілік заттардың сапасына қойылатын талаптардың жоғарылауын және оларды сынақтан өткізу шарттарын бір жүйеге келтіру қажеттілігін көрсететін бірқатар толықтырулар мен өзгерістер енгізілді. Мақалада сынама алу тәртібін сипаттайтын бөлім бар. Сынақ жүргізілетін жануарлардың массасы ұлғайтылды, оларды күтіп-баптау шарттары және оларды бақылау мерзімі көрсетілді. Сынақ жүргізу үшін 10 000 құтыдан немесе ампуладан аспайтын әрбір партиядан екі құты немесе ампула таңдалады. Саны көп партиялардан әр сериядан үш ампула (құты) таңдалады. Бір қатардағы үлгілердің мазмұнын араластырып, салмағы 19–21 г екі жынысты сау ақ тышқандарға тексереді.Зерттелетін ерітіндіні бес тышқанның құйрық көктамырына енгізеді және жануарларды 48 сағат бойы бақылайды.Дәрілік зат бар деп саналады. эксперименттік тышқандардың ешқайсысы көрсетілген мерзімде өлмесе, сынақтан өтті. Тіпті бір тышқан өлген жағдайда сынақ белгілі бір схема бойынша қайталанады. Жеке мақалаларда уыттылық сынамасын жүргізудің басқа тәртібі де белгіленуі мүмкін.
Пирогендік сынамалар. Бактериялық пирогендер – адам мен жылы қанды жануарлардың қан айналымына түскен кезде дене температурасының жоғарылауын, лейкопенияны, қан қысымының төмендеуін және басқа да ағзалар мен жүйелерде өзгерістерді тудыруы мүмкін микробтық текті заттар. Пирогендік реакцияны грамтеріс тірі және өлі микроорганизмдер, сондай-ақ олардың ыдырау өнімдері тудырады. Рұқсат етілген мазмұн, мысалы, натрий хлоридінің изотониялық ерітіндісінде 1 мл-ге 10 микроорганизмдер, ал 100 мл-ден көп емес енгізу кезінде 1 мл-ге 100 рұқсат етіледі. Пирогенділік сынағы инъекцияға арналған суға, инъекциялық ерітінділерге, иммунобиологиялық препараттарға, инъекциялық ерітінділерді дайындау үшін қолданылатын еріткіштерге, сондай-ақ клиникалар бойынша пирогендік реакцияны тудыратын дәрілік формаларға ұшырайды.
SP XI-де, сондай-ақ әлемнің басқа елдерінің фармакопеяларында сынақ стерильді сұйықтықтарды құлақ венасына енгізгеннен кейін қояндардың дене температурасын өлшеуге негізделген пирогенділігін тексерудің биологиялық әдісі енгізілген. Сынамаларды іріктеу уыттылық сынағы сияқты жүргізіледі. Жалпы мақалада (ГФ XI, 2-шығарылым, 183--185 б.) тәжірибелік жануарларға қойылатын талаптар және оларды сынауға дайындау тәртібі көрсетілген. Зерттелетін ерітінді дене салмағы 0,5 кг-нан аспайтын үш қоянға (альбинос емес) сыналады. Дене қызуын термометрді тік ішекке 5--7 см тереңдікке енгізу арқылы өлшейді.Үш қояндағы жоғары температураның қосындысы 1,4°С-қа тең немесе одан төмен болса, зерттелетін сұйықтықтар пирогенді емес деп саналады. Егер бұл мөлшер 2,2°С-тан асса, онда инъекцияға немесе инъекцияға арналған ерітінді пирогенді болып саналады. Үш қояндағы температураның көтерілуінің қосындысы 1,5-2,2°С аралығында болса, сынақ қосымша бес қоянда қайталанады. Барлық сегіз қояндағы температураның жоғарылауының қосындысы 3,7°С аспаса, зерттелетін сұйықтықтар пирогенді емес деп саналады. Жеке ФС-да температура ауытқуының басқа шектері көрсетілуі мүмкін. Тәжірибеде болған қояндарды, егер олар енгізген ерітінді пирогенді болмаса, 3 күннен кешіктірмей қайтадан осы мақсатта пайдалануға болады. Егер енгізілген ерітінді пирогенді болып шықса, қояндарды тек 2-3 аптадан кейін ғана қайта пайдалануға болады. SP XI-де SP X-пен салыстырғанда алғаш рет сынау үшін пайдаланылған қояндардың реактивтілігіне тест енгізілді және оларды қайталама сынақтар үшін пайдалану мүмкіндігі туралы бөлім нақтыланды.
Ұсынылған SP XI биологиялық әдіс спецификалық болып табылады, бірақ пирогендік заттардың құрамын сандық түрде көрсетпейді. Оның елеулі кемшіліктеріне сынаудың күрделілігі мен ұзақтығы, жануарларды ұстау, оларға күтім жасау қажеттілігі, сынауға дайындықтың күрделілігі, нәтиженің әрбір жануардың жеке ерекшеліктеріне тәуелділігі және т.б. Сондықтан пирогенділікті анықтаудың басқа әдістерін жасауға әрекет жасалды.
Қояндардың пирогенділігін анықтаумен қатар, оны зарарсыздандыру алдында зерттелетін дәрілік формадағы микроорганизмдердің жалпы санын есептеуге негізделген микробиологиялық әдіс шетелде қолданылады. Біздің елімізде 3% калий гидроксиді ерітіндісін пайдаланып гель түзу реакциясы арқылы грамтеріс микроорганизмдерді іріктеп анықтауға негізделген пирогендерді анықтаудың қарапайым және қолжетімді әдісі ұсынылды. Техниканы химиялық және фармацевтикалық кәсіпорындарда қолдануға болады.
Пирогендікті анықтаудың биологиялық әдісін химиялық әдіспен ауыстыру әрекеті жасалды. Құрамында пирогендері бар ерітінділер хинонмен өңдеуден кейін тетрабромфенолфталеинмен теріс реакция көрсетті. Күкірт қышқылының қатысуымен триптофанмен пирогенал 1 мкг немесе одан да көп пирогендік құрамында қоңыр-таңқурай түстерін түзеді.
Спектрдің УК аймағында пирогенді заттарды спектрофотометриялық анықтау мүмкіндігі зерттелді. Құрамында пирогені бар микроорганизмдер дақылдарының фильтратының ерітінділері 260 нм-де әлсіз абсорбциялық максимум көрсетеді. Сезімталдық жағынан пирогендерді анықтаудың спектрофотометриялық әдісі қояндардағы биологиялық сынақтан 7-8 есе төмен. Алайда, егер ультрафильтрация спектрофотометриядан бұрын жүргізілсе, онда пирогендердің концентрациясына байланысты биологиялық және спектрофотометриялық анықтаулар арқылы салыстырмалы нәтижелерге қол жеткізуге болады.
Хинонмен өңдегеннен кейін пироген ерітінділері қызыл түске ие болады және 390 нм-де жарықты сіңіру максимумы пайда болады. Бұл пирогендерді анықтаудың фотоколориметриялық әдісін жасауға мүмкіндік берді.
Люминесценттік әдістің жоғары сезімталдығы оны 1*10-11 г/мл концентрациядағы пирогенді заттарды анықтау үшін қолданудың алғы шарттарын жасады. Инъекцияға арналған суда және кейбір инъекциялық ерітінділерде родамин 6G және 1-анилино-нафталин-8-сульфонат бояғыштары арқылы пирогендерді люминесцентті анықтау әдістері әзірленді. Әдістер пирогендердің осы бояғыштардың люминесценциясының қарқындылығын арттыру қабілетіне негізделген. Олар биологиялық әдіспен салыстырылатын нәтиже алуға мүмкіндік береді.
Спектрофотометриялық және люминесценттік анықтаулардың салыстырмалы қателігі ±3% аспайды. Инъекцияға арналған судың пирогенділігін анықтау үшін де хемилюминесценттік әдіс қолданылады.
Перспективті әдіс - полярография. Пирогенді дақылдардың фильтраттары өте сұйылтылған күйде болса да оттегінің полярографиялық максимумына күшті басатын әсер ететіні анықталды. Осының негізінде айдауға арналған судың және кейбір инъекциялық ерітінділердің сапасын полярографиялық бағалау әдісі әзірленді.
Гистаминге ұқсас заттардың құрамын тексеру.
Парентеральді енгізілетін дәрілік заттар осы сынақтан өтеді. Оны салмағы кемінде 2 кг болатын екі жыныстағы мысықтарда уретан анестезиясымен орындаңыз. Алдымен жансыздандырылған жануарға гистамин енгізеді, оның осы затқа сезімталдығын тексереді. Содан кейін 5 минуттық интервалмен гистаминнің стандартты ерітіндісін қайталап енгізу (0,1 мкг/кг) стандарт ретінде қабылданатын екі дәйекті инъекция арқылы қан қысымының бірдей төмендеуі алынғанша жалғасады. Осыдан кейін 5 минут аралықпен зерттелетін ерітінді жануарға гистамин енгізген жылдамдықпен енгізіледі. Егер сынақ дозасын енгізгеннен кейін қан қысымының төмендеуі стандартты ерітіндіге 0,1 мкг/кг енгізуге жауаптан аспаса, препарат сынақтан өтті деп саналады.

Достарыңызбен бөлісу:




©melimde.com 2022
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет
Сабақтың тақырыбы
бойынша жиынтық
жиынтық бағалау
Сабақ тақырыбы
Сабақтың мақсаты
ғылым министрлігі
тоқсан бойынша
бағдарламасына сәйкес
бағалауға арналған
Сабақ жоспары
Реферат тақырыбы
жиынтық бағалауға
сәйкес оқыту
арналған тапсырмалар
Қазақстан республикасы
білім беретін
оқыту мақсаттары
бағалау тапсырмалары
рсетілетін қызмет
Жалпы ережелер
жиынтық бағалаудың
республикасы білім
бекіту туралы
тоқсанға арналған
Қазақстан тарихы
Қазақстан республикасының
мерзімді жоспар
арналған жиынтық
қызмет стандарты
болып табылады
жалпы білім
арналған әдістемелік
бағалаудың тапсырмалары
Мектепке дейінгі
оқыту әдістемесі
Қазақ әдебиеті
нтізбелік тақырыптық
пәнінен тоқсанға
Зертханалық жұмыс
Инклюзивті білім
Әдістемелік кешені
республикасының білім
білім берудің
туралы жалпы
Қазақстанның қазіргі
Қысқа мерзімді
Жұмыс бағдарламасы
қазақ тілінде
қазіргі заман
туралы хабарландыру
атындағы жалпы